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超纯水在PCR检测中的作用

 发布时间:2020-05-28 点击量:44

超纯水在PCR检测中的作用

 

今天带大家走入核酸检测的常用方法PCR方法,以及如何在PCR检测过程中降低检测结果假阴性概率。

 

一、什么是PCR技术?

 

PCR技术又称为聚合酶链式反应。是一种用于放大扩增特定的DNA的片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。

在病毒检测中,核酸检测被定义为临床诊断的金标准,RT-PCR技术被反复提到,它是一种将RNA反转录和PCR相结合的技术。首先在反转录酶.的作用下,将提取到的RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,在DNA聚合酶作用下不断扩增(变性-退火-延伸多个循环)合成目的片段并进行分析。

 

二、PCR用水

 

PCR技术目前多搭配试剂盒使用,也有用户自行制备反应体系,无论哪个过程都需要使用水。无论是近年来季节性爆发的甲流乙流,还是目前全球都在经历的病毒,在检测过程中都涉及一个痛点,那就是如何尽可能提高核酸检测的准确性,减少假.阴性结果出现的可能性。

我们首先分析一下假阴性结果出现的原因,以病毒核酸检测为例,假阴性的主要原因有:

1病人病程:不同病程,患者体内病毒载量不同;

2采样部位:咽拭子、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等不同采样部位病毒载量均不同;

3采样准确性:拭子质量,工作人员操作等;

4试剂盒的质量:引物设计以及水质控制。

为了顺利将提取到的RNA反转录并实现DNA的成功扩增,必须抑制核糖核酸酶(RNases)的降解作用,如果试剂盒用水内含RNases,将极有可能导致假阴性结果的出现。

 

三、去除RNases的主要方法

 

1高压灭菌:即便是在180°C下高压灭菌4h之后,RNases仍保持某些活性,且某些细菌失活会释放更多的RNases;

2 DEPC(二乙基焦碳酸酯处理法) :利用二乙基焦碳酸酯(DEPC) 处理方法使酶失活是用来抑制水溶液中RNases活性的常见方法。然而,二乙基焦碳酸酯是一种可疑致癌物,处理须小心;同时该方法虽然能够使酶失活,却无法将其从水中去除,同时清除多余的DEPC过程中,会产生乙醇,二氧化碳等其他污染物;

3超滤法:超滤是一种真正能够从水溶液中清除RNases的方法。

 

四、卓越超滤膜介绍

 

超滤膜被大量用于水处理工程。超滤技术反渗透预处理、饮用水处理、中水回用等领域发挥着越来越重要的作用。超滤技术在酒类和饮料的除菌与除浊,药品的除热原以及食品及制药物浓缩过程中均起到关键作用。

超滤过滤孔径和截留分子量的范围一直以来定义较为模糊,一般认为超滤膜的过滤孔径为0.001-0.1微米,截留分子量(Molecular weigh cut-off, MWCO)为1,000-1,000,000 Dalton。严格意义上来说超滤膜的过滤孔径为0.001-0.01微米,截留分子量为1,000-300,000 Dalton。若过滤孔径大于0.01微米,或截留分子量大于300,000 Dalton的微孔膜就应该定义为微滤膜或精滤膜。

一般用于水处理的超滤膜标称截留分子量为30,000-300,000 Dalton,而截留分子量为6,000-30,000 Dalton 的超滤膜大多用于物料的分离、浓缩、除菌和除热源等领域。

 

五、卓越超纯水机推荐

ZYPTF落地式+压力桶 +软水器)

产品说明:

ZYPFT系列超级微量型超纯水器是新一代秉承“人性化设计、高定位标准”研发生产的高端超纯水机,将城市自来水纯化为符合国标GB/T6682-2008的实验室一级和三级超高纯度实验室用水,基于PLC全自动控制及ARM系列单片机和触摸屏技术的人机界面,实现图形显示制水流程,流量监控耗材更换功能,定时定质取水功能,历史数据查询功能等多项技术,专业适用于科研分析等高要求实验项目。

技术指标:

机型

I

II

C

台上式(T

ZYPFT-I-10/20T

ZYPFT-II-10/20T

ZYPFT-C-10/20T

落地式(L

ZYPFT-I-20/40/60/100L

ZYPFT-II-20/40/60/100L

ZYPFT-C-20/40/60/100L

进水水源

总溶解性固形物含量TDS200ppm,水压1.0-5.0kg/cm工作水温25

制水量

10/20/40/60/100/小时

出水流速

1.5-2.0/分钟(水箱储水时)

RO出水水质(μS/cm

电导率<5μS/cm(在线监测),污染物去除率99。5%

UP出水水质(MΩ.cm

电阻率18 .25MΩ.cm(在线监测)

微颗粒物(0。1um)<1/ml、微生物<0。1cfu/ml、重金属离子<0。1ppb、可溶性硅(以sio2计)<0。01mg/L

吸光度(254nm,1cm光程:≤0.001   可氧化物质[以(0)计,㎎/L]: 0。08

阳离子含量≤0.1ppb (铁(Fe)0.005ppb ,铜(Cu)0。005ppb ,钾(K)<0。02 ppb,铝(Al)0.005ppb,锌(Zn)<0.02ppb , 铬(Cr)<0。005ppb , (Na)0.01ppb;

阴离子含量0.1ppb(氯(Cl)0.01ppb, 亚硝酸根(NO)0。02ppb, 硝酸根(NO)0.02ppb, 硫酸根(SO)0.01ppb);

选型配置

 触摸屏+MF终端微滤+UV紫外灯

   触摸屏+MF+UV+UF超滤

 双显表+MF终端微滤+UV紫外灯

总有机碳TOC

     TOC)<3ppb 

TOC)<3ppb   

        TOC)<3ppb 

热源(内毒素)

---------------

           0。001EU/ml

         ---------------

       


ZYPTF台上式+无菌水箱)

邮箱:3003670488@qq.com

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